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使用熒光核酸染色劑 LUCS 13 對活細胞進行染色

更新時間:2024-03-15      點擊次數:54

LUCS 13 是一種可滲透細胞的核酸染料,在與核酸結合后呈現綠色熒光。該染料具有高熒光產量,且結構與 SYTO™13 染料相同。

LUCS 13 用于對活的和死的真核細胞以及革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌中的 DNA 和 RNA 進行染色。染料被 488 nm 的藍色激光激發。其熒光發射在熒光素通道中檢測到,與 DNA 結合時峰值為 509 nm,與 RNA 結合時峰值為 514 nm。

該染料可用于同時標記細胞不可滲透的核標記物(例如 YoDi-3),以使用熒光顯微鏡和流式細胞術評估細胞活力。

協議

確切的方案取決于具體的細胞類型和實驗任務。一般來說,可以描述如下:

  1. 準備 50 µM LUCS 13 儲備溶液。為此,將 990 µl 去離子水添加到 10 µl 5 mM LUCS 13 溶液中。儲備液可以等分并冷凍以供長期儲存。

  2. 要制備 1 µM LUCS 13 工作溶液,請將 20 µl 50 µM LUCS13 庫存添加到 980 µl PBS 中。

  3. 以合適的方式小心地從生長表面去除貼壁細胞。對于懸浮細胞,從下一點開始工作。

  4. 用冷 PBS(pH 7.4)清洗細胞一次。 300 g離心 5 分鐘獲得種子細胞 。

  5. 將細胞在 1 ml 1 μM LUCS 13 工作溶液中于 37°C 孵育 30 分鐘。

  6. 300 g離心 5 分鐘去除染料溶液 。

  7. 用 PBS 清洗細胞一次。

  8. (可選)如有必要,可以將細胞在含 3.7% 甲醛的 PBS 中固定 15 分鐘,用 PBS 洗滌,然后用另一種染色劑重新染色。

重要的

  • 處理 LUCS 13 溶液時請使用塑料瓶,因為稀釋的染料可能會粘在玻璃上。

  • 使用無磷酸鹽緩沖液(例如鹽水中的 15 mM HEPES)可獲得更明亮的染色結果。

  • 在開始實驗之前,測試幾種染料濃度范圍從 10 nM 到 5 µM,以確定最佳的染料稀釋度。染色結果受許多因素影響:生長培養基、細胞密度、其他細胞類型的存在、染色持續時間等。



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